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Basis for selection of improved carbohydrate-binding single-chain antibodies from synthetic gene libraries

Par Conseil national de recherches du Canada

DOITrouver le DOI : https://doi.org/10.1073/pnas.92.11.4992
AuteurRechercher : 1; Rechercher : 1; Rechercher : 1; Rechercher : 2; Rechercher : ; Rechercher : 1; Rechercher : ; Rechercher : 1
Affiliation
  1. Conseil national de recherches Canada. Institut des sciences biologiques du CNRC
  2. Conseil national de recherches Canada. Institut de recherche en biotechnologie du CNRC
FormatTexte, Article
Résumé
A technique is described for the simultaneous and controlled random mutation of all three heavy or light chain complementaritj-determining regions (CDRs) in a single-chain Fv specific for the 0 polysaccharide of SalmoneUla serogroup B. Sense oligonucleotides were synthesized such that the central bases encoding a CDR were randomized by equimolar spiking with A, G, C, and T at a level of 10%/1 while the antisense strands contained inosine in the spiked regions. Phage display of libraries assembled from the spiked oligonucleotides by a synthetic ligase chain reaction demonstrated a bias for selection of mutants that formed dimers and higher oligomers. Kinetic analyses showed that oligomerization increased association rates in addition to slowing dissociation rates. In combination with some contribution from reduced steric clashes with residues in heavy-chain CDR2, oligomerization resulted in functional affinities that were much higher than that of the monomeric form of the wild-type single-chain Fv.
Date de publication
Maison d’éditionNational Academy of Sciences
Dans
  • Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 92, nº 11 (23 mai 1995) : 4992–4996.
Langueanglais
Publications évaluées par des pairsOui
Numéro du CNRC34517
DENG1995A
Numéro NPARC3539517
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Identificateur de l’enregistrementb7181ec7-1168-45f2-b5c0-42e19039f8c8
Enregistrement créé2009-03-01
Enregistrement modifié2024-07-16
Date de modification :