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A modification of isocitrate and malate dehydrogenase assays for use in crude cell free extracts

Par Conseil national de recherches du Canada

DOITrouver le DOI : https://doi.org/10.1016/0003-2697(73)90376-X
AuteurRechercher : 1; Rechercher : 1; Rechercher : 1
Affiliation
  1. Conseil national de recherches du Canada. Laboratoire régional des prairies
FormatTexte, Article
Résumé
A modification of the assays for isocitrate and malate dehydrogenase, using phenazine methosulphate and 2,6-dichlorophenolindophenol, permits measurements on cell-free extracts. Phenazine methosulfate at concentrations higher than 30 nmoles/3 ml prevents the accumulation of NADPH or NADH and thus reduces errors due to endogenous oxidation of these compounds. The use of 2,6-dichlorophenolindophenol rather than a tetrazolium salt as the terminal electron acceptor allows continuous spectrophotometric measurement of enzyme activities. Assay for NADP-specific isocitrate dehydrogenase can be performed in aerobic or anaerobic conditions. Assays for malate dehydrogenase should be run under anaerobic conditions because of the interference by oxygen on the phenazine methosulfate mediated reduction of 2,6-dichlorophenolindophenol by NADH. Under anaerobic conditions, where NADH oxidase is inoperative, the phenazine methosulfate/dichlorophenolindophenol assay is more sensitive than the assay using direct measurement of NADH at 340 nm.
Date de publication
Maison d’éditionElsevier
Dans
  • Analytical Biochemistry 54, nº 2 (août 1973) : 477–483.
Langueanglais
Publications évaluées par des pairsOui
Identificateur000326977390376X
NRCC-13170
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Identificateur de l’enregistrementa99ec858-f63e-4f0a-a2af-0769bb664b2d
Enregistrement créé2023-11-09
Enregistrement modifié2023-11-09
Date de modification :